實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或熒光集團(tuán),利用熒光信號(hào)來實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板濃度進(jìn)行定量分析。 二手實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀 一般包括:實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀+開機(jī)檢測(cè)試劑+通用電腦+自動(dòng)分析軟件。京科瑞達(dá)二手儀器告訴你二手實(shí)時(shí)熒光定量PCR選擇指南。
儀器的性能需要考量:線性范圍、檢測(cè)靈敏度、檢測(cè)精密度、反應(yīng)時(shí)間、檢測(cè)通道數(shù)、檢測(cè)樣本量等。而二手實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的硬件配置主要看:溫控模塊、光路檢測(cè)模塊。
溫度控制是qPCR技術(shù)的核心所在,為了實(shí)現(xiàn)高準(zhǔn)確度,實(shí)時(shí)PCR熱系統(tǒng)應(yīng)確保整個(gè)加熱塊的溫度均勻性,確保能夠以相同速率的反應(yīng)處理所有的樣本。
01 溫控速率
升降溫速度快的是好設(shè)備,但是單一模塊升降溫速度快并不代表樣本升降溫速度也快,所以還要看樣本的升降溫速度是否也快,注意zui大升降溫速度≠平均升降溫速度。
02 溫控精度
控溫模塊中銀質(zhì)半導(dǎo)體控溫模塊目前是比較好的,因?yàn)殂y是金屬中銀的導(dǎo)熱性能較高,升降溫速度快,孔間溫度均一性好,邊緣效應(yīng)相應(yīng)減少。
金屬的熱傳導(dǎo)系數(shù)表:銀 > 銅>金> 鋁> 鐵> 錫> 鉛 。
溫度準(zhǔn)確度和溫度均一性越小越好。
01 光源
光強(qiáng)比較:光強(qiáng)比較:髙強(qiáng)度白光LED > 鹵鎢燈 >單色LED
白光LED的亮度約是鹵鎢燈的3倍左右,單色LED的10倍左右,能夠捕捉到更多的熒光信號(hào),是專業(yè)光源領(lǐng)域的新技術(shù)代表。
壽命比較:壽命比較:髙強(qiáng)度白光LED = 單色LED >鹵鎢燈
白光LED的壽命長(zhǎng)達(dá)10000小時(shí)以上,一般可以使用5-10年左右,基本上超過了一般科研儀器的正常工作壽命,基本終身無需更換光源,而鹵鎢燈光源基本每2年就要更換一次,費(fèi)時(shí)費(fèi)力,南方更是不足一年就要更換一次。
02 檢測(cè)器
熒光定量PCR靈敏度:冷CCD>CCD>光電倍增管 CPM >光電二極管
CCD作為熒光信號(hào)的接受器,其質(zhì)量直接決定了儀器的檢測(cè)靈敏度和穩(wěn)定性。10℃的冷CCD,和常溫CCD有著質(zhì)的區(qū)別,在專業(yè)光學(xué)領(lǐng)域,冷CCD的造價(jià)成本至少要比常規(guī)CCD高出一倍以上。冷CCD在更低的溫度下進(jìn)行光信號(hào)捕捉,能夠提供更高的光感靈敏度和更低背景噪音。因此,有的熒光定量PCR能夠穩(wěn)定區(qū)分1000和2000拷貝的濃度差異,而有的只能做到區(qū)分5000和10000個(gè)拷貝數(shù)。
03 光路傳導(dǎo)
光路設(shè)計(jì)應(yīng)盡可能有效消除邊緣效應(yīng),光路設(shè)計(jì)是否有效消除孔間邊緣效應(yīng),可以自行進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)。
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