二手HPLC液相色譜可以分為液/固吸附色譜、液/液分配色譜、離子交換色譜和凝膠滲透色譜四類。其基本理論和定性定量分析方法與氣相色譜基本相同。二手HPLC液相色譜儀五大組成系統(tǒng) :輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
二手HPLC液相色譜的輸液系統(tǒng)包括流動相貯存器、高壓泵和梯度淋洗裝置。流動相貯存器為不銹鋼或玻璃制成的容器,可以貯存不同的流動相。高壓泵是液相色譜儀重要的部件之一。由于液相色譜儀所用色譜柱直徑細(xì),固定相粒度小,流動相阻力大,因此,必須借助于高壓泵使流動相以較快的速度流過色譜這。高壓泵需要滿足以下條件:能提供150-450kg/cm2的壓強;流速穩(wěn)定,流量可以調(diào)節(jié);耐腐蝕。目前所用的高壓泵有機械泵和氣動放大泵兩種。梯度淋洗裝置可以將兩種或兩種以上的不同極性溶劑,一定程序連續(xù)改變組成,以達(dá)到提高分離效果,縮短分離時間的目的。它的作用與氣相色譜中的程序升溫裝置類似。
梯度淋洗裝置分為兩類:一類叫外梯度裝置;一類內(nèi)梯度裝置。外梯度裝置是流動相在常壓下混合,靠一臺高壓泵壓至色譜柱;內(nèi)梯度裝置是先將溶劑分別增壓后,再由泵按程序壓入混合室,再注入色譜柱。
二手HPLC進樣器是將樣品送入色譜柱的裝置,進樣方式可以分為兩種:閥進樣或自動進樣。比較常用的是采用自動進樣器裝樣。
分離系統(tǒng)進樣系統(tǒng)一般液相色譜多采用六通閥進樣。先由注射器將樣品常壓下注入樣品環(huán)。然后切換閥門到進樣位置,由高壓泵輸送的流動相將樣品送人色譜柱。樣品環(huán)的容積是固定的,因此進樣重復(fù)性好。
二手HPLC分離系統(tǒng)包括色譜柱、連接管、恒溫器等。色譜柱是液相色譜儀的心臟。它是由內(nèi)部拋光的不銹鋼管制成,一般長10—50cm,內(nèi)徑2—5mm,柱內(nèi)裝有固定相。液相色譜的固定相是將固定該涂在擔(dān)體上而成。擔(dān)體有兩類:一類是表面多孔型擔(dān)體;另一類是全多孔型擔(dān)體。
近年來又出現(xiàn)了全多孔型微粒擔(dān)體。這種擔(dān)體檢度為5—10um,是由nm級的硅膠微粒堆積而成,又叫堆積硅珠。由于顆粒小,所以柱效高,是目前廣泛使用的一種擔(dān)體。在液相色譜分析中,適當(dāng)提高柱溫可改善傳質(zhì),提高桂效,縮短分析時間。因此,在分析時可以采用帶有恒溫加熱系統(tǒng)的金屬夾套來保持色譜拄的溫度。溫度可以在室溫到60℃間調(diào)節(jié)。
二手HPLC液相色譜的檢測器很多,常用的有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器等。
二手HPLC對色譜數(shù)據(jù)進行處理,并參與HPLC儀器的自動控制。
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